Principe d'extraction d'ADN

L'isolement ou l'extraction et la purification de l'ADN à partir de cellules constituent l'une des conditions préalables les plus courantes de la biologie moléculaire contemporaine, reflétant le passage de la biologie cellulaire à la biologie moléculaire, d'in vivo à in vitro.

Le principe d'extraction d'adn implique de nombreuses techniques différentes qui sont disponibles pour isoler l'ADN génomique à partir de cellules bactériennes; Cependant, ils suivent tous les étapes habituelles de la rupture cellulaire, de l’élimination des protéines, suivie de la libération du matériel génétique. L'objectif principal de cette expérience est de fournir un ADN de haute qualité pouvant être stocké pendant plusieurs années dans des conditions appropriées.

Principe extraction d'adn

Les étapes courantes impliquant l'isolement de l'ADN comprennent la lyse de cellules, suivie de l'élimination des protéines, des glucides, de l'ARN, etc. Les perturbations des parois cellulaires et des membranes sont généralement réalisées avec une combinaison appropriée d'enzymes pour digérer la paroi cellulaire (généralement le lysozyme) et de détergents pour rompre les membranes. Le détergent ionique le plus couramment utilisé à cette étape est le dodécyl sulfate de sodium (SDS). L'ARN est généralement dégradé par l'addition de RNase exempte de DNase. Les oligoribonucléotides résultants sont séparés de l'ADN de haut poids moléculaire sur la base de leur plus grande solubilité dans les solvants non polaires (généralement alcool / eau). Les protéines sont soumises à une dénaturation chimique et / ou à une dégradation enzymatique par addition de protéinase-K. La technique d'élimination des protéines la plus courante implique la dénaturation et l'extraction dans la phase organique, à savoir le phénol et chloroforme.

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