Extraction d'ADN: Rôle de Tris EDTA et EDTA | BioEduc

Réactifs requis pour l'extraction de plasmide par lyse alcaline

L'extraction de (généralities sur les plasmides) plasmide (Voir le protocol d'extraction) par lyse alcaline nécessite un ensemble de reactifs et tampons d'extraction et de purification des acides nucléiques citons, un milieu de culture pour la préparation de susupension bacterienne comme Bouillon Luria – Bertani, et autre tampons et reactifs, Tris EDTA Buffer, Glucose, Acide éthylènedinitrilo tétraacétique ou EDTA, Hydroxyde de sodium NaOH, Acétate De Potassium et acide acétique glacial, la purté de l'ADN est très indispensable pour que la PCR marche convenablement.

Rôle de Tris EDTA Buffer

Le tampon TE (Tris-Edta) est préparé en mélangeant du Tris 50 mM et de l'EDTA 50 mM dans de l'eau et en maintenant le pH 8,0. Le constituant principal du tampon TE est le Tris, qui agit comme un tampon de pH commun pour contrôler le pH lors de l'ajout d'autres réactifs. L'EDTA chélate des cations comme le Mg²⁺. Par conséquent, le tampon TE est utile pour solubiliser l'ADN en le protégeant de la dégradation.

Rôle de Acide éthylènedinitrilo tétra-acétique EDTA

L'EDTA se lie aux cations divalents de la paroi cellulaire, affaiblissant ainsi l'enveloppe cellulaire. Après la lyse cellulaire, l'EDTA limite la dégradation de l'ADN en liant les ions Mg²⁺, cofacteurs nécessaires des nucléases bactériennes. De cette manière, il inhibe les nucléases conduisant à la rupture de la paroi cellulaire et de la membrane cellulaire.