Rôle de Hydroxyde de sodium NaOH
L’hydroxyde de sodium NaOH est utilisé pour séparer l’ADN chromosomique bactérien de l’ADN plasmidique. L'ADN chromosomique et l'ADN cisaillé sont tous deux linéaires, alors que la plupart de l'ADN plasmidique est circulaire. Lorsque le milieu de solution devient basique en raison de l'ajout d'hydroxyde de sodium, les molécules d'ADNdb sont séparées par dénaturation et leurs bases complémentaires ne sont plus associées les unes aux autres. D'autre part, bien que l'ADN plasmidique soit dénaturé, il n'est pas séparé. Les brins circulaires peuvent facilement trouver leurs brins complémentaires et se renaturer en molécule d'ADNdb plasmidique circulaire une fois que la solution alcaline est neutralisée. Cette propriété unique de l'ADN plasmidique est exploitée pour séparer l'ADN plasmidique de l'ADN chromosomique en ajoutant du NaOH.
Réactifs requis pour l'extraction de plasmide par lyse alcaline
L'extraction de (généralities sur les plasmides) plasmide (Voir le protocol d'extraction) par lyse alcaline nécessite un ensemble de reactifs et tampons d'extraction et de purification des acides nucléiques citons, un milieu de culture pour la préparation de susupension bacterienne comme Bouillon Luria – Bertani, et autre tampons et reactifs, Tris EDTA Buffer, Glucose, Acide éthylènedinitrilo tétraacétique ou EDTA, Hydroxyde de sodium NaOH, Acétate De Potassium et acide acétique glacial, la purté de l'ADN est très indispensable pour que la PCR marche convenablement.
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