Comment choisir les séquences d'amorce d'adn ?

Dans la plupart des cas, la (polymérisation en chaine) PCR est effectuée sur des échantillons d'ADN dans lesquels un scientifique connaît déjà les séquences d'ADN qui bordent la région d'intérêt. Comme le génome entier de nombreuses espèces a déjà été déterminé, les informations sur les séquences peuvent provenir de la base de données génomique des espèces d'intérêt. Par exemple, si vous souhaitez cloner un gène humain ou une partie du gène humain, tel que le gène de la β globine, vous rechercheriez cette séquence génétique dans la base de données du génome humain et décideriez de la liaison de vos deux amorces. Vous pouvez alors commander des amorces avec des séquences complémentaires à ces sites. Voir en détaille La PCR : la Taq sans concession (1:design d’amorces)

amplification d'adn par pcr

Processus d’amplification d’ADN par PCR

Le matériau de départ d'une expérience de PCR peut être un mélange complexe d'ADN. Les deux amorces se lient à des sites spécifiques de l'ADN car leurs bases sont complémentaires sur ces sites. Le résultat final de la PCR est que la région qui est flanquée par les amorces, qui contient le gène d'intérêt, est amplifiée. Le terme amplification signifie que chaque cycle de PCR se déroule en trois étapes: dénaturation, hybridation d'amorce et extension ou élongation d'amorce. Les amorces utilisées dans les expériences de PCR réelles ont généralement une longueur d'environ 15 à 20 nucléotides. La région entre les deux amorces a généralement une longueur de centaines de nucléotides.

Voir les réactifs requis pour PCR

De nombreux exemplaires de la région ont été réalisés. En d'autres termes, la région entre les deux amorces a été clonée. Les amorces sont des réactifs clés dans une expérience de PCR. Les amorces sont fabriquées chimiquement. Ils ne sont généralement pas fabriqués dans des laboratoires de recherche ou des laboratoires cliniques, mais dans des établissements universitaires ou industriels. Les chercheurs ou les cliniciens commandent simplement les amorces dont ils ont besoin avec une séquence spécifiée.