Réactifs requis pour l'extraction d'ARN et leur rôle

Rôle de Trizol

Lors de l'isolement et de l'extraction d'acides nucléiques de bactéries, qu'il s'agisse d'ARN bactérien total ou d'ADN, la préparation d'une culture fraîche est fortement recommandée et pour cela nous utilisons un milieu riche tel que le bouillon Lauria Bertani (LB)

Trizol est un réactif prêt à l'emploi pour l'isolement de l'ARN total des cellules bactériennes. Ce réactif est une solution monophasique de phénol et d'isothiocyanate de guanidine. Trizol maintient généralement l'intégrité de l'ARN ainsi que la perturbation des cellules et la dissolution des membranes cellulaires.

extraction arn total

L'isothiocyanate de guanidine est un puissant dénaturant protéique qui aide également à l'inactivation des RNases. De plus, le phénol acide partage l'ARN avec le surnageant aqueux pour une séparation supplémentaire dans les étapes suivantes. Un pH acide est requis pour l'isolement de l'ARN, comme à pH neutre, les partitions d'ADN à la phase aqueuse. Le réactif Trizol peut être obtenu auprès des fabricants sous la forme de TRIzol (nom de marque Invitrogen) ou TRI (nom de marque Sigma-Aldrich).

Préparation de Trizol

Cependant, il peut également être préparé en laboratoire selon les méthodes:

Produits chimiques requis

Les produits chimiques suivants étaient nécessaires: thiocyanate de guanidinium 4 M, citrate de sodium 25 mM (pH 7,0), N-laurosylsarcosine 0,5% (p/v) et 0,1 M de 2-mercaptoéthanol

Pour préparer le stock

Dissolvez 250 g de thiocyanate de guanidinium. Ajouter 17,6 ml de citrate de sodium 0,75 M, pH 7,0. Ajouter 26,4 ml de N-laurosylsarcosine à 10% (p/v). Conserver moins de 3 mois à température ambiante.

Le tampon TE ou Tris EDTA peut être préparé en mélangeant du Tris 50 mM et de l'EDTA 50 mM dans de l'eau et en maintenant le pH à 8,0. En tant que constituant majeur du tampon TE, Tris agit comme un tampon de pH commun pour contrôler le pH lorsque d'autres réactifs sont ajoutés au cours des étapes suivantes.