Rôles de chloroforme: alcool isoamylique et Isopropanol dans l'extraction d'ADN
Rôle de Phénol: chloroforme: alcool isoamylique
C'est l'extraction et la purification de l'ADN par une méthode d'extraction liquide–liquide. Il sépare des mélanges de molécules basés sur la solubilité différentielle des molécules individuelles dans deux liquides non miscibles différents. Le chloroforme mélangé avec du phénol est plus efficace pour dénaturer les protéines que le seul réactif. L'alcool isoamylique de chloroforme est un type de détergent qui se lie aux protéines et aux lipides de la membrane cellulaire et les dissout. De cette manière, les liaisons qui retiennent les membranes cellulaires sont rompues. Après dissolution de la membrane cellulaire, l’alcool isoamylique de chloroforme forme des amas de complexes protéines-lipides; ainsi, un précipité est formé. Le principe de cette précipitation est que le complexe lipide-protéine est un composé non aqueux et que l’ADN est un composé aqueux. Ainsi, la phase aqueuse supérieure contient de l'acide nucléique, la phase intermédiaire contient des lipides et la phase organique inférieure contient des protéines.
Rôle de Isopropanol
L'ADN est hautement insoluble dans l'isopropanol et par conséquent, l'isopropanol se dissout dans l'eau pour former une solution qui provoque l'agrégation et la précipitation de l'ADN dans la solution. L'isopropanol est utilisé comme une meilleure alternative à l'éthanol en raison de son potentiel plus élevé de précipitation de l'ADN à des concentrations plus faibles. En outre, l'évaporation prend moins de temps.
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